凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術(shù),又稱(chēng)分子排阻色譜法,其分離物質(zhì)的原理為分子篩原理,且多用于分離有機(jī)大分子化合物,如蛋白質(zhì)、多肽、多糖等。
凝膠色譜與凝膠層析基本上是一致的只是固定相存在差異。凝膠層析又稱(chēng)分子篩過(guò)濾、排阻層析,操作條件比較溫和,可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行,并且對(duì)分離成分理化性質(zhì)的保持有獨(dú)到之處。兩者的共同點(diǎn)是都不需要有機(jī)溶劑。凝膠色譜色譜一般用在HPLC等分析場(chǎng)合。而凝膠層析一般用在制備的時(shí)候。
凝膠色譜法和電泳的區(qū)別是什么?
凝膠色譜法又稱(chēng)分子排阻色譜法。分離依據(jù)是目的物分子量的大小。主要用于高聚物的相對(duì)分子質(zhì)量分級(jí)分析以及相對(duì)分子質(zhì)量分布測(cè)試。形象來(lái)說(shuō)更像是“分子篩”。大分子物質(zhì)先流出,小分子物質(zhì)后流出。
凝膠電泳的原理比較簡(jiǎn)單。當(dāng)一種分子被放置在電場(chǎng)當(dāng)中時(shí),它們就會(huì)以一定的速度移向適當(dāng)?shù)碾姌O,這種電泳分子在電場(chǎng)作用下的遷移速度,叫做電泳的遷移率。它同電場(chǎng)的強(qiáng)度和電泳分子本身所攜帶的凈電荷數(shù)成正比。也就是說(shuō),電場(chǎng)強(qiáng)度越大、電泳分子所攜帶的凈電荷數(shù)量越多,其遷移的速度也就越快,反之則較慢。由于在電泳中使用了一種無(wú)反應(yīng)活性的穩(wěn)定的支持介質(zhì),如瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺膠等,從而降低了對(duì)流運(yùn)動(dòng),故電泳的遷移率又是同分子的摩擦系數(shù)成反比的。已知摩擦系數(shù)是分子的大小、極性及介質(zhì)粘度的函數(shù),因此根據(jù)分子大小的不同、構(gòu)成或形狀的差異,以及所帶的凈電荷的多少,便可以通過(guò)電泳將蛋白質(zhì)或核酸分子混合物中的各種成分彼此分離開(kāi)來(lái)。形象來(lái)說(shuō)更像是“馬拉松”。不過(guò)影響因素不僅僅是分子量了。